人超敏C反應蛋白(hs-CRP)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒使用說明書
使用前仔細閱讀本說明書。本酶聯(lián)免疫試劑盒是基于雙抗體夾心技術(shù)原理,來檢測人超敏C反應蛋白(hs-CRP),只能用于研究用途,不得用于醫(yī)學診斷。
用 途: 用于人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中超敏C反應蛋白(hs-CRP)的測定。
工作原理
本試劑盒采用的是雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定樣品中人超敏C反應蛋白(hs-CRP)的水平。向預先包被了人超敏C反應蛋白(hs-CRP)單克隆抗體的酶標孔中加入超敏C反應蛋白(hs-CRP),溫育;洗滌后,加入HRP標記過的超敏C反應蛋白(hs-CRP)抗體。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶,然后加入底物A、B,產(chǎn)生藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺與樣品中人超敏C反應蛋白(hs-CRP)的濃度呈正相關(guān)。
試劑盒組成
1 |
標準品(32μg/L) |
0.5ml |
7 |
顯色劑A液 |
6ml |
2 |
標準品稀釋液 |
3ml |
8 |
顯色劑B液 |
6ml |
3 |
酶標包被板 |
12孔×8條 |
9 |
終止液 |
6ml |
4 |
酶標試劑 |
6ml |
10 |
說明書 |
1份 |
5 |
30倍濃縮洗滌液 |
20ml |
11 |
封板膜 |
2張 |
6 |
樣品稀釋液 |
6ml |
12 |
密封袋 |
1個 |
需要而未提供的試劑和器材
1. 37℃恒溫箱。
2. 標準規(guī)格酶標儀。
3. 精密移液器及一次性吸頭
4. 蒸餾水
5. 一次性試管
6. 吸水紙
注意事項
1. 從2-8℃取出的試劑盒,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2. 各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。
3. 建議所有標準品、樣本都做雙份檢測。如標本中待測物質(zhì)含量過高,請先用PBS稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再按說明書操作進行測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
4. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。
5. 為避免交叉污染,要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。
6. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
7. 底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。
洗板方法
手工洗板方法:甩掉酶標板內(nèi)的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,重復此過程數(shù)次。
自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
標本要求
1.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
2.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。
操作程序
1. 標準品的稀釋:(本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶請按照說明自行在小試管中倍比稀釋):
16μg/L (5號標準品) 120μl的原倍標準品加入120μl的標準品稀釋液
8μg/L (4號標準品) 120μl的5號標準品加入120μl的標準品稀釋液
4μg/L (3號標準品) 120μl的4號標準品加入120μl的標準品稀釋液
2μg/L (2號標準品) 120μl的3號標準品加入120μl的標準品稀釋液
1μg/L (1號標準品) 120μl的2號標準品加入120μl的標準品稀釋液
2. 分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準品孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品孔中加入稀釋好的標準品50μl;在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。輕輕晃動混勻,37℃溫育30分鐘。
3. 棄去液體,甩干,每孔加滿稀釋后洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。如此重復5次,拍干。
4. 每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。輕輕晃動混勻,37℃溫育30分鐘。
5. 棄去液體,甩干,每孔加滿稀釋后洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。如此重復5次,拍干。
6. 每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘。
7. 取出酶標板,每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
8. 測定:以空白孔調(diào)零,在450nm波長下測量各孔的吸光度值(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
9. 根據(jù)標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。應記住由于樣品稀釋了的,其實際濃度應該乘以總稀釋倍數(shù)。
操作程序總結(jié):
準備試劑,樣品和標準品
加入準備好的樣品和標準品,37℃反應30分鐘
洗板5次,加入酶標試劑,37℃反應30分鐘
洗板5次,加入顯色液A、B,37℃顯色10分鐘
加入終止液
15分鐘之內(nèi)讀OD值
計算
檢測范圍:0.8μg/L→20μg/L
規(guī)格: 96T/盒
保存: 2-8℃
有效期: 6個月(2-8℃)。